搜狗做题网研究枯草芽孢杆菌芽孢形成的培养基
来源：学生作业帮 编辑：搜狗做题网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/24 17:41:56
研究枯草芽孢杆菌芽孢形成的培养基
芽孢杆菌属的一种.单个细胞0.0.8×2～3微米,着色均匀.无荚膜,周生鞭毛,能运动.革兰氏阳性菌,芽孢0.0.9×1.1.5微米,椭圆到柱状,位于菌体中央或稍偏,芽孢形成后菌体不膨大.菌落表面粗糙不透明,污白色或微黄色,在液体培养基中生长时,常形成皱醭.需氧菌.可利用蛋白质、多种糖及淀粉,分解色氨酸形成吲哚.有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系,故常作选育核苷生产菌的亲株或制取5'-核苷酸酶的菌种.在遗传学研究中应用广泛,对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚.广泛分布在土壤及腐败的有机物中,易在枯草浸汁中繁殖,故名.
常用检测观察培养基配方：1L蒸馏水+10g蛋白胨+3g牛肉膏+15-20g琼脂+5gNaCl,非增殖培养基配方
1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂
枯草芽孢杆菌原生质体的制备
1 培养枯草芽孢杆菌
取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中,36℃振荡培养14 h,各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中,36℃振荡培养 3 h,使细胞生长进入对数前期,各加入25 u/mL 青霉素,使其终浓度为0.3 u/mL,继续振荡培养2 h.
2.收集细胞
各取菌液10 mL,4000 r/min 离心10 min,弃上清液,将菌体悬浮于磷酸缓冲液中,离心.如此洗涤两次,将菌体悬浮10 mL SMM 中,每mL 约含108～109 活菌为宜.
3.总菌数测定
各取菌液0.5 mL,用生理盐水稀释,取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基,36℃培养24 h 后计数.此为未经酶处理的总菌数.
4.脱壁
二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液,加入5 mL 溶菌酶溶液,溶菌酶浓度为100 ug/mL,混匀后于36℃水浴保温处理30 min,定时取样,镜检观察原生质体形成情况,当95%以上细胞变成球状原生质体时,用4000 r/min 离心10 min,弃上清液,用高渗缓冲液洗涤除酶,然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中.立即进行剩余菌数的测定.
5.剩余菌数测定
取0.5 mL 上述原生质体悬液,用无菌水稀释,使原生质体裂解死亡,取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL,涂布于完全培养基平板上,36℃培养24～48 h,生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞.
计算酶处理后剩余细胞数,并分别计算二亲株的原生质体形成率.原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数.
常用检测观察培养基配方：1L蒸馏水+10g蛋白胨+3g牛肉膏+15-20g琼脂+5gNaCl,非增殖培养基配方
1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂
枯草芽孢杆菌原生质体的制备
1 培养枯草芽孢杆菌
取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中,36℃振荡培养14 h,各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中,36℃振荡培养 3 h,使细胞生长进入对数前期,各加入25 u/mL 青霉素,使其终浓度为0.3 u/mL,继续振荡培养2 h.
2.收集细胞
各取菌液10 mL,4000 r/min 离心10 min,弃上清液,将菌体悬浮于磷酸缓冲液中,离心.如此洗涤两次,将菌体悬浮10 mL SMM 中,每mL 约含108～109 活菌为宜.
3.总菌数测定
各取菌液0.5 mL,用生理盐水稀释,取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基,36℃培养24 h 后计数.此为未经酶处理的总菌数.
4.脱壁
二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液,加入5 mL 溶菌酶溶液,溶菌酶浓度为100 ug/mL,混匀后于36℃水浴保温处理30 min,定时取样,镜检观察原生质体形成情况,当95%以上细胞变成球状原生质体时,用4000 r/min 离心10 min,弃上清液,用高渗缓冲液洗涤除酶,然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中.立即进行剩余菌数的测定.
5.剩余菌数测定
取0.5 mL 上述原生质体悬液,用无菌水稀释,使原生质体裂解死亡,取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL,涂布于完全培养基平板上,36℃培养24～48 h,生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞.
计算酶处理后剩余细胞数,并分别计算二亲株的原生质体形成率.原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数.