搜狗做题网反转录cDNA吸光度值260 280=1.66
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/06/25 05:58:44
先从细胞提取总RNA,然后根据大多数真核mRNA含有多聚腺嘌呤（polyadenylicacid,polyA）尾的特点,用寡聚dT纤维素柱将mRNA分离出,以mRNA为模板,在多聚A尾上结合12－18
DNA啊!PCR是以脱氧核糖核苷酸为原料的而MRNA的组成是核糖核苷酸原料都不同而且PCR技术的原理是利用DNA双链的原理.以MRNA为原料会得到双链的RNA
理论应该用CDNA进行因为设计,但要保证你提取的mRNA的质量,尽量减少降解.可以在原序列基础上先写出互补序列再进行引物设计.
反转录是指从RNA转录为DNA,但是分两步,因为rna是单链的,所以第一步得到是是单链DNA,而第二步则是以上步合成的单链DNA为模板,合成双链DNA.前一步就是一链反转录,而第二步叫做cdna双链的
反转录失败或者RNA质量不好再问：有没有可能是引物的设计不好？（引物二聚体的范围是在100bp左右）如果是cDNA反转录不好，该如何检测呢？谢谢再答：有可能是引物的问题；在P目的基因的时候，建议你同时
最好重新在反转录了,因为可能你的基因已经被你两次反转录富集了.虽然actin只有一条单带,但是你的PCR反应的循环数未知道,带的亮度也未知.
生物中的DNA不是全部转录成RNA的即使转录成RNA,mRNA也只是其中一部分,许多RNA都不翻译成蛋白,比如siRNA、miRNA等等逆转录有随机引物逆转录和polyA逆转录,如果用polyA逆转录
影响不大,不用考虑.TRIZOL等常用方法提出来的总RNA都有一些蛋白质污染.
第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合.第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA.37度水域是让cDNA聚合.第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一
由于基因的选择性表达,人的肝细胞和神经细胞中的mRNA不同',因此反转录的cdna也不同
可以大概估算.考虑一下几个因素：1.大多数RNA是28s,16s,5s等rRNA,mRNA其实占少数.他们都会反转录为cDNA..你若估计mRNA反转为cDNA的量较难.2、反转录和你添加的引物量有关
因为DNA中含有很多片段是无效的,而mRNA中的所有基因都是有效的,所以通过mRNA最终合成的cDNA中的基因全都是有效的
不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.再问：那么我引物设计的时候，是不是以mRNA为模版与以CDNA为模版设计的引物都可以？再答：都可以，别忘
在PCR仪中,95度变性,72度延伸,Tm温度退火,来回30-35个循环,最后4度,就能得到反转录的cDNA.
可以比较反正都要除以GAPDH来归一化的
是的,是单链.想获得双链,请看如下：为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementaryDNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链.与RNA链
逆转录生成单链DNA和MRNA的杂交链后来单链DNA在与游离的核苷酸合成双链
操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水65C反应10min,冰上放置5min后：这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开；再加dNTP,RNaseA,BUFFER,MTV逆转录酶,反应
DNA转录可得到mRNA,而mRNA逆转录可得到DNA,经过此途径得到的DNA叫做cDNA.主要过程是以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下合成DNAcDNA文库中的DNA都是经过这个方法得到的,所以说
DTT上的巯基可以保护逆转录所用酶的二硫键,增加蛋白稳定性.还是加吧~