扩2K的CDNA

基因组文库含有全部基因序列cDNA文库由mRNA逆转录而来,无内含子及外编码区..

基因组文库是指含有某种生物全部基因随机片段的重组DNA克隆群体　以生物细胞的总mRNA为模板,用逆转录酶合成互补的双链cDNA,然后接到载体上,转入到宿主后建立的基因文库就是cDNA文库.相比之下,c

1先根据部分序列设计一对引物验证一下序列是否正确（很确信就免）,需要的话克隆,有文库的话杂一下文库；2根据已知序列设计三条巢式引物,进行5’RACE,拿到5’序列；3同时设计巢氏引物,进行3’RACE

最好重新在反转录了,因为可能你的基因已经被你两次反转录富集了.虽然actin只有一条单带,但是你的PCR反应的循环数未知道,带的亮度也未知.

生物中的DNA不是全部转录成RNA的即使转录成RNA,mRNA也只是其中一部分,许多RNA都不翻译成蛋白,比如siRNA、miRNA等等逆转录有随机引物逆转录和polyA逆转录,如果用polyA逆转录

就是利用mRNA进行逆转录得到的DNA因为这些DNA不含有非编码区和内含子所以不是完整的原DNA于是成为cDNA克隆在这里就是逆转录的意思（或者理解为复制DNA）集合就是这些cDNA的组合在一起这样形

对于真核生物来说,基因组文库包含了这种生物体内的所有基因（包括外显子、内含子和非编码区),而cDNA文库只是包含了所有基因中的一部分,因为cDNA文库来源于这种生物体内的mRNA的逆转录,而mRNA实

cDNA由mRNA逆转录出一条链,再按照互补原则扩增出另一条链,从而形成双链DNA.与基因组相比,cDNA不包括非编码区的序列,也不包括内含子的序列,因此全长cDNA序列要比基因组序列少.

可以大概估算.考虑一下几个因素：1.大多数RNA是28s,16s,5s等rRNA,mRNA其实占少数.他们都会反转录为cDNA..你若估计mRNA反转为cDNA的量较难.2、反转录和你添加的引物量有关

可以比较反正都要除以GAPDH来归一化的

cDNA是双链DNA.其中cDNA第一链是和mRNA互补的,另一链是相同的.再问：请问NCBI上的cDNA序列，列出的是和mRNA相同的吗？我查了一个基因，显示cDNA只和mRNA内的部分相同。cDN

cDNA克隆是以mRNA为原材料,经体外反转录合成互补的DNA(cDNA),再与载体DNA分子连接引入寄主细胞.每一cDNA反映一种mRNA的结构,cDNA克隆的分布也反映了mRNA的分布.特点是：①

是的,就是你所想的一样.

cDNA文库是用mRNA逆转录得到的DNA,只含有编辑对应蛋白质的信息,没有控制该基因表达的相关元件（启动子、终止子、增强子）,也没有内含子.因此,cDNA文库的基因没有启动子和终止子.

这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式（alternativesplici

不知你的目的是什么,估计你应该是检测某种细胞或组织中是否表达这种蛋白!首先你得知道此种蛋白质的核苷酸序列,从而设计引物,然后提取此细胞中的总mRNA,依此引物进行反转录特异性扩增你需要验证的蛋白质DN

1、理论上所有表达出来的mRNA都能够被转录成cDNA,所以合成的cDNA含有目的基因和内参基因.获得的cDNA是不是扩增的总RNA的全长,要看究竟有多长,一般2kb左右能得到全长,由于逆转录酶效率的

只含有引物往前的一段序列一条mRNA上只有一个基因所以不存在什么下游所有基因而且反转录是从mRNA的3‘到5’走的.再问：原核生物的mRNA怎么会只有一个基因呢？原核生物的基因不是以操纵子形式存在的吗

1）若是直接知道该蛋白质中氨基酸的序列,可以用来推测氨基酸中的碱基序列,并用化学合成仪直接合成该cDNA2)用该基因转录出的mRNA进行逆转录3）用鸟枪法直接从原核生物体内分离

没明白……cDNA作为互补DNA,就是以mRNA为模板通过RT-PCR合成得到的.所以,PCR产物在核酸电泳EB染色之后应该显示cDNA条带才对.你若问什么没得到这样的条带,那么很可能是你引物设计的问