CTAB法提取植物RNA含有DNA污染
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 22:36:00
多放一点液氮,磨得时间适当长一些.如果你的样品比较多,在液氮还没有蒸发前迅速把粉末转移到EP官管中,然后把它暂时放到-20的冰箱中,等所有的样品全部磨好后统一加CTAB.你做实验的时候材料最好尽量新鲜
真是牛人啊~没加沉淀剂吧?
CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的
(1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5mlEppendorf管中;(2)加入800μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000r
前面的步骤没有操作好,要么是你的样品比较特殊,含有较多的色素或脂肪,先用电泳检测一下,如果条带清楚就可以用,如果混乱要修改实验设计.不知道你提的是动物还是植物的DNA,估计可能是植物色素或者是叶片的蜡
液氮只是为了便于破碎植物组织,没有也一样能提取DNA,毕竟加CTAB后还要65度水浴,分解得厉害的话就减少振荡,或增大CTAB用量,使DNA尽可能多地浸取出来.再问:那研磨的时候为了是它充分的研磨是要
CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammoniumbromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的
(1)可以的,液氮冷冻更容易破碎细胞壁释放DNA,但是不冷冻也没关系的,提取的DNA量即使少点也足够满足试验要求.(2)-20度足够保存,用一年以上都没问题,超低温保存时间当然更长,但是切忌反复冻融,
呃……能说下具体的改动部分吗?一般来说,改良法是应用于多年生植物组织的DNA提取,含有较多的酚,多糖,硅质等,棉花和水稻的DNA提取也需要一定的修改.思路有两个,一方面尽量去除杂质、蛋白和脂类,另一方
拖尾的出现一般就是DNA已经降解,不过在主带明显的前提下,拖尾并不会影响一般的PCR扩增.如果不理想的话,可以重新提取DNA,建议用惠彤TM磁珠法试剂盒,可以直接进行后续的PCR
种子类较难研磨,一般加液氮3次连续研磨,要保持样品冻结状态不能化冻,以免降解.研磨粗细程度一般应跟粗面粉差不多,无明显颗粒感即可,冻结状态研磨不会导致DNA降解.
Tris饱和酚分上相(tris)和下相即有机相酚,这样保存可以避免酚的挥发以及防止酚类氧化成醌,抽提时取下层酚相.在吸取的时候要将枪头插到水相以下的酚相.若吸到的是上层tris溶液,它会与我们的上清互
下游做PCR的话,应该保证模板的纯度,CTAB法提取多半会得到浓度不错但纯度不够的DNA,建议将得到的DNA进行纯化,或者直接使用试剂盒提取,现在的国产试剂盒都还不错的,节约时间又不贵
核酸电泳时使用的是EB染料吗?如果提取的样品中还有较多的RNA,RNA分子量较小,电泳时跑在前面,会结合较多的EB,影响DNA的观察,建议RNA酶37度消化30分钟.再问:用的goldview。再答:
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5mlEppendorf管中;(2)加入800μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000r/
加入LiCl这一步.氯化锂可以选择性沉淀RNA.
对于植物来说一般用CTAB法,CTAB的优势是对多糖的去除比较彻底,缺点么就是繁琐了点,一般一提要一天
看你的DNA用来干嘛了,如果要求不高可以不加再问:做普通PCR,我知道能提出DNA几乎就可以了,只是我想弄明白加BI这一步的作用,有劳赐教,谢谢。再答:你的bi全称是什么?
我用过CTAB法提取植物叶片DNA,会得到叶片中所有的DNA,总DNA里当然包括叶绿体和线粒体DNA,使用这种模板可以进行叶绿体和线粒体基因组上的扩增,我以前做过TRNL_F这个基因的扩增,用的就是C