p53基因在血细胞表达检测
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 13:19:20
正常P53的生物功能好似“基因组卫士”,在G1期检查DNA损伤点,监视基因组的完整性.如有损伤,P53蛋白阻止DNA复制,以提供足够的时间使损伤DNA修复;如果修复失败,P53蛋白则引发细胞凋亡.
用标记基因去筛选只是初步筛选而已,实际上包括重组DNA和为重组的运载体,都有标记基因,所以,还要进一步进行检测和筛选,比方说检验目的基因的产物的有无、或用DNA分子杂交法检验目的基因是否存在、或用个体
错误.检到目的基因只能证明目的基因转入到受体中,但该基因是否表达还不一定,还要进行性状验证.因为很多外源基因转入后是沉默的.
用“p53Gallusgallus”和“p53Homosapiens”在NCBI的database中的“gene”选项中搜索即可.这个是人的:
是人体抑癌基因.该基因编码一种分子量为53kDa的蛋白质,命名为P53.p53基因的失活对肿瘤形成起重要作用.
首先找到小鼠和人类p53基因的序列,然后进ncbi首页,里面靠右的位置popularresources下第一个选项“blast”,打开以后,找“nucleotideblast”.进到那个页面有个框就是
可以,其实就是northernblot了.不过这是在转录水平上的检测.要检测是否表达为蛋白质还是需要做westernblot.
表达,用试剂盒检测吧.
actin一般作为内参使用,意味着它的表达水平在多数细胞中是比较一致的.如果需要比较actin的话,就需要使用其他的内参了,比如GAPDH.具体选择什么基因作为内参,就和你选取的组织有关,最好查阅一下
mrna水平northernblotting蛋白质水平westernblotting你的问题在于表达量比较低可以考虑一些检测灵敏的blotting手段如用地高辛
现在你到了基因序列的网站,最下面的那一大段就是外显子2到9的序列.一般设计RT-PCR引物需要跨外显子交界,这样可以提高特异性.你可以先拷贝外显子2的序列(216..289)atggaggagccgc
wt=wildtype就是正常的p53基因不是突变之类的至于p53基因是啥自己去wiki下吧一个很重要的抑癌基因
查自己的p53意义不大.你要查p53就需要取自己一部分细胞.所谓p53突变引起肿瘤是在某一个细胞内发生,而其他体细胞的p53仍然正常.发生了突变的这一个细胞不打断增值,最终形成肿瘤.你现在没有发生肿瘤
检测到目的基因导入了并不一定说就能表达出来,这里面还有很多其他的原因会导致基因是否表达,所以一般要先检验目的基因是否导入之后(如果导入了但又没表达,这时可以研究是其他原因了),再去检验是否表达.这是一
1、进入NCBI主页,在下拉框中选择GENE,然后输入p53,点击进入,出现摘要页面,选择物种Musmusculus(在右边物种栏),更新摘要页面,选择你想要的基因,点击后进入基因的报告页面,点击右侧
你要的是人的还是鼠的阿大鼠编码框184atggaggattcacagtcggatatgagcatcgagctccctctgagtcaggagacattttcatgcttatggaaacttcttcct
Inlungcancerp53geneexpressionofpositivescale?
将这个基因和某种报告基因(如GFP,GUS)融合在同一个表达载体上,转化生物体,看报告基因在哪表达,就说明基因在哪表达.
按厂家说明,免疫原为野生型,但是野生型和突变型都可以识别
最直接方便.也可以提取菌液中的质粒以质粒为模板来扩增复杂而且浪费但是菌体检测也只是初步的.