跨内含子设计引物

Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就

完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你

怎样用primer-blast设计引物http://wangyufeng222.blog.163.com/blog/static/128222070201110511213331/

用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说

引物若跨内含子的话,引物仅能以3'端的一小部分结合基因组DNA,这样的话Tm会很低.在较高的退火温度下,引物几乎无法和基因组DNA结合来引发聚合,而主要是与能够完全配对的cDNA结合并引发反应.

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.

用primerpremie

一、可以使用oligo6或者primer5等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数.二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经

问这个做什么?这个可是分子生物的范畴啊,你要考试?还是仅仅兴趣?下面不是我写的,复制来的.不过相当准确,你可以参考外显子(exon)sequenceofagene'sDNAthattranscribe

NCBI有免费的设计软件非常好用,权威把你的序列贴到最上方的空格就可以了,开始的时候,所有的参数都用系统的默认值就可以,不需要修改.

是从NCBI里面的序列库中搜索的,自动搜索符合筛选条件的序列,从而给出引物序列blast是要求NCBI里面有的序列才能验证.你研究的物种基因组测序结果发布了吗?如果发布了的话就不用担心序列不全了

首先查道你的基因序列（NCBI搜）,第二查引物设计原则,第三下载个引物设计软件设计,简单好用的有primerpremier5.0,这些都能在网上搜到,软件用法也能搜到.

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关

第一次的引物再用,效果不好,酶需要一些额外片段来结合在模板上,所以第二对引物要靠里.引物不同,能增加特异性,这也是巢式PCR的意义所在啦.看到图片会更好理解哈:hand:

普通PCR规则：1、18-25bp；2、Tm值在45-60；3、2个引物之间没有超过5bp的互补序列；4、CG%在40-60%；5、避免连续出现3个以上的CCC或GGG；6、不要迷信百度.

PCR扩增引物要在目的片段两测150bp位置为宜,这样设计的原因是既可以有效控制扩增产物的大小,因为太长的片读一个测序反应无法得到全场序列,又可以给测序设计内引物留出足够的空间.由PCR特性决定的,不

如果设计在内含子序列中,RT-PCR检测到的可能是未被剪切的preRNA或RNA中污染的核DNA,如果设计在外显子序列中,RT-PCR检测到的可能是成熟mRNA,未被剪切的preRNA或RNA中污染的

我觉得不用吧计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是无所谓,如果你是要在附加碱基中加入一个小T