真菌分离培养步骤具体是怎样的?包括消毒 无菌水洗 晾干 什么的……

真菌分离培养步骤具体是怎样的?包括消毒 无菌水洗 晾干 什么的……

.1.1 实验的准备
沙堡琼脂培养基的制备：用天平称取蛋白胨10克、麦芽糖40克、琼脂20克,用量筒量取蒸馏水1000毫升置烧杯中混匀,在电炉上加热熔化,加热过程中不断用玻璃棒搅拌,调整PH值至5.4,倒入锥形瓶中,115℃灭菌20分钟,倾注平板,冷却[1].
无菌室、接种箱的清洁：用酒精棉球将接种箱的内部全部擦洗干净,放入试管架、酒精灯、标签、接种环、笔、火柴等实验用具放入接种箱内,密封接种箱.依次打开接种箱与无菌室的紫外灯,紫外线灭菌20分钟.
3.1.2 划线分离培养
在酒精灯火焰下进行以下操作：
（1）从发霉的红薯上和酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用28℃培养2-3天,分离出几个真菌菌株.将分离株重新进行平板划线分离,挑取单菌落表面的少许孢子用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行载片小培养,经28℃培养2—3天于低倍镜下观察,通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定.
（2） 左手持皿,用左手的拇指、食指及中指将皿盖揭开20度左右的角度（角度越小越好,以免空气中的细菌进入皿中将培养基污染）.划线前先将接种环稍稍弯曲,这样易和平皿内琼脂面平行,不致划破培养基.
（3） 右手持接种环,将上述霉变物分区划线接种于沙堡琼脂培养基平板中,划完前一个区域后将接种环在火焰上灼烧灭菌,冷却后与前一区域的最后一两条折线接触划出第二区域,依次类推,共划三到四个区域.划线中不宜过多的重复旧线,以免形成菌苔.
（4） 接种完毕,在皿底上作好日期,平皿倒扣,置28℃培养2-3天.
（5） 将分离培养得到的几个分离株用沙堡琼脂培养基重新进行平板划线分离,以得到纯的单一的菌落.
再问： 消毒？无菌水洗？晾干？
再答： 稀释分离法 　　(1)取灭菌培养皿三个，平放在湿纱布上，编号 　　(2)用灭菌吸管吸取灭菌水，在每一皿中分别注入0．5～1．0ml。 　　(3)用移植环蘸一滴孢子悬浮液，与第一个培养皿中的灭菌水混合，再从第一个培养皿移三环到第二个培养皿中，混合后再移三环到第三个培养皿中。 　　(4)将熔化开冷却到45～50C的培养基，分别倒在三个培养皿中(为防止细菌污染，也可以向每个培养皿中事先加入1-2滴25％乳酸)，摇匀，凝固，要使培养基与稀释的菌液充分混匀。 　　提示：倒平板时的培养基温度一定要掌握好，过热易将病原菌烫死而使分离失败，过冷则倒入培养皿中后难以形成平板，而成为起伏不平的表面，不利于分离。为大体估计培养基温度，可将盛培养基的器皿靠在人手背上，如果手背感到烫但尚可以忍耐，则大体为45~50C。 　　(5)将培养皿翻转后置恒温箱(2513)中培养，数日后观察菌落生长情况。 　　挑菌。将培养后长出较为整齐一致的单个菌落分别挑取，接种到斜面培养基上，置25℃左右培养。待菌长出后，检查菌是否单纯，若有其他菌混杂，就要再一次进行分离纯化，直到获得纯株培养 应该有所帮助吧！