搜狗做题网请教qRT-PCR数据统计问题
来源：学生作业帮 编辑：搜狗做题网作业帮 分类：数学作业 时间：2024/05/25 12:02:49
请教qRT-PCR数据统计问题
老师您好,请问荧光定量PCR数据统计中,control组（指实验中选取的对照组,一般为第一组）应该如何计算?由于对照组的Δct与自己相减所得的ΔΔct为0,2的0次方为1,因此重复三次实验后的三个对照组均为1,那此时应该如何做对照组的error bar?并且此时用SPSS分析难道都用1? 非常感谢
老师您好,请问荧光定量PCR数据统计中,control组（指实验中选取的对照组,一般为第一组）应该如何计算?由于对照组的Δct与自己相减所得的ΔΔct为0,2的0次方为1,因此重复三次实验后的三个对照组均为1,那此时应该如何做对照组的error bar?并且此时用SPSS分析难道都用1? 非常感谢
这样算：
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异,就可以计算标准差了.
这么简单的统计分析,用不着SPSS吧, excel就可以解决了.
再问： 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均值设为1”是指把对照组的ΔCT还是ΔΔCT还是2的-ΔΔCT的平均值设为1啊？谢谢！
再答： 首先，你重复做一个样本（3个重复的孔），那只能算一个值（取平均）。 我说的1是指的相对表达量，不是ΔCT。你得到每个样本中目的基因和内参的CT值后，就可以算出相对表达量了，对不对？ 这时，取所有对照组的平均值，设为1. 每次实验的对照组再和这个平均值1比较，就是对照组的标准差了。
再问： 您所说的目的基因和内参的CT值相减得到的不就是ΔCT吗？假设三次实验某一基因的对照组的均值为4，5，6，则均值为5，此时把5设为1，然后再怎么算啊？不好意思麻烦您再解答一下，非常感谢
再答： 按照你说的，5为平均值，那三个组分别和5比较，不就是-1， 0， 1三个值吗。得到的相对表达量就是0.5， 1 和2. 不管是CT值还是表达量，你都可以算出标准差，做出error bar了。
再问： 我知道了，可是这样出来的error bar好大啊，给人感觉误差会很大呀
再答： 这个error bar反应的是真实的差异啊，怎么会给人误差很大的感觉呢，我只是举了个例子，实际上你只要加样量控制的好，对照组的误差都是很小的。不会出现4， 5， 6这样的差异，一般都是在小数点后的差异
再问： 你是用graphpad作图吧？柱状图是选SD还是SEM？无论选哪个误差（0.5，1，2
）都是均值（1）的一半 ，这error bar也太大了吧
再答： 我都是用excel直接分析作图的，至于error bar有多大，那是实验决定的，和哪个方法作图无关啊。你看我贴在文库里那篇文章的图就知道了，对照组的error bar一般都很小的。如果很大，说你加样误差太大了。 另外，作图的时候，只显示上半截的bar就可以了。
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异,就可以计算标准差了.
这么简单的统计分析,用不着SPSS吧, excel就可以解决了.
再问： 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均值设为1”是指把对照组的ΔCT还是ΔΔCT还是2的-ΔΔCT的平均值设为1啊？谢谢！
再答： 首先，你重复做一个样本（3个重复的孔），那只能算一个值（取平均）。 我说的1是指的相对表达量，不是ΔCT。你得到每个样本中目的基因和内参的CT值后，就可以算出相对表达量了，对不对？ 这时，取所有对照组的平均值，设为1. 每次实验的对照组再和这个平均值1比较，就是对照组的标准差了。
再问： 您所说的目的基因和内参的CT值相减得到的不就是ΔCT吗？假设三次实验某一基因的对照组的均值为4，5，6，则均值为5，此时把5设为1，然后再怎么算啊？不好意思麻烦您再解答一下，非常感谢
再答： 按照你说的，5为平均值，那三个组分别和5比较，不就是-1， 0， 1三个值吗。得到的相对表达量就是0.5， 1 和2. 不管是CT值还是表达量，你都可以算出标准差，做出error bar了。
再问： 我知道了，可是这样出来的error bar好大啊，给人感觉误差会很大呀
再答： 这个error bar反应的是真实的差异啊，怎么会给人误差很大的感觉呢，我只是举了个例子，实际上你只要加样量控制的好，对照组的误差都是很小的。不会出现4， 5， 6这样的差异，一般都是在小数点后的差异
再问： 你是用graphpad作图吧？柱状图是选SD还是SEM？无论选哪个误差（0.5，1，2
）都是均值（1）的一半 ，这error bar也太大了吧再答： 我都是用excel直接分析作图的，至于error bar有多大，那是实验决定的，和哪个方法作图无关啊。你看我贴在文库里那篇文章的图就知道了，对照组的error bar一般都很小的。如果很大，说你加样误差太大了。 另外，作图的时候，只显示上半截的bar就可以了。