毕赤酵母发酵液上清浓缩后测出蛋白浓度了,但跑不出来胶

来源：学生作业帮编辑：搜狗做题网作业帮分类：综合作业时间：2024/06/08 21:16:29

毕赤酵母发酵液上清浓缩后测出蛋白浓度了,但跑不出来胶
毕赤酵母发酵上清浓缩后BCA测浓度,约300μg/ml,但为什么SDS胶却跑不出来,什么有没有呢?

SDS-PAGE跑不出可能是胶浓度不对,分子量与胶浓度不是很匹配
也有可能BCA检测的浓度不是蛋白浓度,比如你的浓缩液颜色较重,可能会干扰浓度检测时的紫外吸收,造成有读数,但其实是没有蛋白在里面的
如果要确认表达,可以尝试将发酵原液,离心回收上清液,浓缩产物一起做一下Western Blot
再问：我是16kd的蛋白，用的12%的胶。
BCA测的时候是和别人一起的，测出的OD值和她有的样品的差不多，这样也可能是没用蛋白的么。
再答： 16KDa跑12%的胶可能稍微稀了点
建议换成15%的胶再跑一跑

BCA测浓度有OD值不能保证一定会有蛋白的
你可以试试用TritonX-100这样的表面活性剂或者颜色较深的酵母培养基去测测BCA，也会有吸收的

像之前说的，要确认表达，光靠测浓度是不够的。还是WB更靠谱一点
再问：谢谢你的回答！下次试试用15的胶跑跑看。
我的酵母工程菌是之已经完成的了，但是-80冻存了很久，我的酵母活性特别差，酵母培养基用的就是YPD，还有什么培养基是可以激发酵母菌的活性的么？颜色较深的培养基是指什么？
再答：工程菌悬液可以重新在平板上涂布下，形成单菌落，取单菌落划线。
毕赤酵母培养基一般都用YPD的

颜色较深的培养基只是打个比方，主要意思就是指有颜色不含蛋白质的溶液可能也能测出浓度。

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