搜狗做题网您好,我培养的菌要提取的是胞外酶,4000r离心后,怎么过滤?过滤之后...
来源：学生作业帮 编辑：搜狗做题网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/12 06:47:18
您好,我培养的菌要提取的是胞外酶,4000r离心后,怎么过滤?过滤之后...
您好,我培养的菌要提取的是胞外酶,4000r离心后,怎么过滤?过滤之后怎么保存?我的菌是降解氧乐果农药的菌.我离心之后是黄色的,是不是用牛肉膏蛋白冻培养基用错了?
难道要用无机盐培养基？
您好,我培养的菌要提取的是胞外酶,4000r离心后,怎么过滤?过滤之后怎么保存?我的菌是降解氧乐果农药的菌.我离心之后是黄色的,是不是用牛肉膏蛋白冻培养基用错了?
难道要用无机盐培养基？
离心后菌体都沉淀到离心管底部了,胞外酶在上清液中.如果担心上清液中还有少量菌体,可以用0.22微米孔径的醋酸纤维素滤膜过滤,抽滤或用针头滤器过滤都可以.滤液保藏在4摄氏度冰箱中可以保存2-3天,如果长时间保藏可以在-20℃,但是反复冻融会损失部分酶活.有些菌体的颜色就是黄色的,平板上生长的单菌落是否黄色?如果是细菌最好测一下它的16S rDNA,鉴定一下是什么菌,知道菌种类别后,它的各种生理生化特征、遗传代谢特性就能查到,对你的实验有帮助.你最好先检测一下发酵滤液对乐果有没有降解作用,如果有明显的降解,证明有胞外酶,再做详细的胞外酶实验,如果没有降解,就不用往下做了.只关注胞内酶就可以了,因为很多细菌没有胞外农药降解酶,真菌胞外酶较多.
再问： 我的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，是不是用错了。那个培养基是黄色的 ，我是不是培养的时候应该用无机盐培养基加农药做唯一碳源。
再答： 无机盐培养基加农药做唯一碳源是可以的，但是菌体长得比较慢。也可以在无机盐+农药培养基中稍微加点儿酵母膏，比如加0.01%，菌体长的快些。
再问： 我给您说下具体流程，1，取菌种于无机盐培养基加入少量农药，培养72h。 2，将液体培养基离心处理，取上清液，即为粗酶液。 3，将粗酶液在冰箱冷冻保存，备用。 这样的做法合理吗？菌是已经划线培养的了，我从平板上取的，白色的。
再答： 更合理的流程，1，取菌种于5瓶无机盐培养基加入浓度为500ppm农药，分别培养24h、36h、48h、60h、72h。 2，将液体培养基离心处理，取上清液，即为粗酶液。检测粗酶液中农药的浓度，如果72小时内的粗酶液中浓度低于200ppm，可以继续往下做，否则停止试验。注意刚接种时也要测一下浓度，应该在400ppm以上。 3，将粗酶液放在4℃冰箱中，24小时内使用。 4，向粗酶液中加入200ppm（原药浓度）农药，室温振荡，每隔2小时取样测定农药浓度。同时用高温灭菌的粗酶液做对照，即向高温灭菌后冷却至室温的粗酶液中加入相同浓度的农药，同时取样，12小时内粗酶液和对照对农药的降解率差别显著的话就有胞外酶，否则无胞外酶。
再问： 您好，我的同学是我的上一步，这些步骤主要是他在做，我不用看是否是胞外酶，这些他已经确定了，我主要是做酶液对农药降解的单因素和响应面，现在我单因素的结论是：最适合的pH值是7，过高或者过低都影响降解率；最适合的温度是25℃，过高或者过低都影响。一定浓度的底物，加10mL的酶液最合适，过多降解率也不会变化，我现在应该如何做响应面？
再答： 你不管是做哪一步，要对整个实验的来龙去脉应有所了解才行，既然你同学做了上一步，你应该知道他/她是怎么培养的啊？怎么现在还在摸索培养方法？你说的一定浓度的底物，加10ml酶液合适，再多降解率不会变化很是奇怪，酶越多降解应该越快啊？最适温度是25℃也很值得怀疑，你能说出30℃与25℃降解率的差别吗？你可能对整个实验了解的还不够，单因子实验结果也不可靠，这样做响应面还不行。先把单因子实验做好，掌握了实验技巧后再做响应面分析吧。响应面分析首先要做中心组合设计实验，根据单因子实验的初步结果设定中心点。数据出来后用统计软件分析即可。
再问： 恩恩 好的，十分感谢。
再问： 我的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，是不是用错了。那个培养基是黄色的 ，我是不是培养的时候应该用无机盐培养基加农药做唯一碳源。
再答： 无机盐培养基加农药做唯一碳源是可以的，但是菌体长得比较慢。也可以在无机盐+农药培养基中稍微加点儿酵母膏，比如加0.01%，菌体长的快些。
再问： 我给您说下具体流程，1，取菌种于无机盐培养基加入少量农药，培养72h。 2，将液体培养基离心处理，取上清液，即为粗酶液。 3，将粗酶液在冰箱冷冻保存，备用。 这样的做法合理吗？菌是已经划线培养的了，我从平板上取的，白色的。
再答： 更合理的流程，1，取菌种于5瓶无机盐培养基加入浓度为500ppm农药，分别培养24h、36h、48h、60h、72h。 2，将液体培养基离心处理，取上清液，即为粗酶液。检测粗酶液中农药的浓度，如果72小时内的粗酶液中浓度低于200ppm，可以继续往下做，否则停止试验。注意刚接种时也要测一下浓度，应该在400ppm以上。 3，将粗酶液放在4℃冰箱中，24小时内使用。 4，向粗酶液中加入200ppm（原药浓度）农药，室温振荡，每隔2小时取样测定农药浓度。同时用高温灭菌的粗酶液做对照，即向高温灭菌后冷却至室温的粗酶液中加入相同浓度的农药，同时取样，12小时内粗酶液和对照对农药的降解率差别显著的话就有胞外酶，否则无胞外酶。
再问： 您好，我的同学是我的上一步，这些步骤主要是他在做，我不用看是否是胞外酶，这些他已经确定了，我主要是做酶液对农药降解的单因素和响应面，现在我单因素的结论是：最适合的pH值是7，过高或者过低都影响降解率；最适合的温度是25℃，过高或者过低都影响。一定浓度的底物，加10mL的酶液最合适，过多降解率也不会变化，我现在应该如何做响应面？
再答： 你不管是做哪一步，要对整个实验的来龙去脉应有所了解才行，既然你同学做了上一步，你应该知道他/她是怎么培养的啊？怎么现在还在摸索培养方法？你说的一定浓度的底物，加10ml酶液合适，再多降解率不会变化很是奇怪，酶越多降解应该越快啊？最适温度是25℃也很值得怀疑，你能说出30℃与25℃降解率的差别吗？你可能对整个实验了解的还不够，单因子实验结果也不可靠，这样做响应面还不行。先把单因子实验做好，掌握了实验技巧后再做响应面分析吧。响应面分析首先要做中心组合设计实验，根据单因子实验的初步结果设定中心点。数据出来后用统计软件分析即可。
再问： 恩恩 好的，十分感谢。