如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开?

如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开? 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 关于基因表达载体基因表达载体,不是用限制酶切开质粒,然后插入目的基因吗?那么,为什么又要有启动子来启动转录出mRNA?要 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 将目的基因与质粒结合的过程中,是不是必须将目的基因的两端与切开的质粒两端都完全连接才可以呢? 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不 目的基因片段与载体质粒的选择? 如果是载体是环形基因,PCR扩充目的基因时,限制酶的切法 如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢? 质粒与目的基因的连接产物是? 构建基因表达载体时,启动子终止子是如何设计加上去的?通常说用同一种酶切割质粒和目的基因,这样可以保证连接,但是目的基因前