用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?

来源：学生作业帮编辑：搜狗做题网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/04 07:58:31

影响转化效率的因素很多,主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）、器皿的清洁度、化合物及无机离子（Rb+、Mn+、二甲基亚砜能适当提高转化率）、质粒与细胞个数的比例（质粒与细胞个数比例在1:1以下时,转化率随着加入DNA的量增加而呈线性增加）.
注意事项：
（1）细胞生长状态和密度.密度不足或过高会使转化率下降.
（2）质粒DNA的质量和浓度.用于转化的质粒DNA应主要是共价闭环DNA.转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,量过多货体积过大时,转化率下降.
（3）试剂的质量.
（4）防止杂菌和其他外源DNA的污染.
（5）根据所需质粒DNA的特性,设置相应的选择性培养基进行筛选,有的可能还需进行多补筛选.

用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些? 农杆菌转化法中,转入受体细胞的是Ti质粒,还是质粒上的T-DNA? 将重组质粒导入大肠杆菌,先用氯化钙溶液处理大肠杆菌和细胞壁有关? 从大肠杆菌中分离出来的质粒,经过Dna重组后,只能导入大肠杆菌中么? 质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上出现菌落,但阴性对照也有菌落出现,这说明什么?原因是什么重组质粒已成功转入大肠杆菌内,-20°冻存,怎样复活,扩大培养? 转入大肠杆菌质粒还可以提取转入农杆菌?为什么? 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码蛋白的基因,并使之在大肠杆菌中表达在DNA质粒提取实验中各种试剂的作用 1、如何以大肠杆菌的质粒DNA为载体克隆一个编码动物的技术的基并使之在大肠杆菌中表达2、简要说明实验中可能遇到的问题及解在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用? 十万火急!用PCR法检测人胰岛素基因是否转入大肠杆菌实验报告