如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法

来源：学生作业帮编辑：搜狗做题网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/02 16:56:25

如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法
转染时每个细胞只近入一个质粒还是很多质粒,过度表达的标准是什么呢

转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好.
顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也能看到.
稳转的话一般需要在质粒上构建某个抗性基因,如嘌呤霉素抗性.这样用抗性培养基多次筛选就可以筛选出稳转的细胞株,但是比较难.

如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法 PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1）转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少. 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求! siRNA转染细胞的方法高中生物转染细胞方法质粒转染细胞不表达的问题~ 列举几种原核微生物基因重组的方法,并简述转化、转导、转染、溶源性转变的差异. 启动子和目的基因起始密码子ATG之间有十几个碱基,构建的质粒用于转染真核细胞对目的基因的表达有影响吗? 我想转染淋巴细胞,是一种悬浮细胞,请问什么转染方法较好? 细胞过表达中质粒如何构建及转染? 腺相关病毒载体携带目的基因转染细胞,目的基因整合到宿主细胞DNA上,为什么可以持续表达? 真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?