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做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?

来源：学生作业帮 编辑：搜狗做题网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/04 21:06:33
做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?
还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板?
这些步骤在实验中有什么作用?
做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?
在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.
内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下.
它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析.用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量.
希望对你有所帮助.
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