人基因组DNA模板,PCR时条件怎么设置?
来源:学生作业帮 编辑:搜狗做题网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/06/24 11:06:31
人基因组DNA模板,PCR时条件怎么设置?
我需要做重叠PCCR模板是基因组DNA,但没有这方面的经验,需要同道人士帮忙,
我需要做重叠PCCR模板是基因组DNA,但没有这方面的经验,需要同道人士帮忙,
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基因组做模板,最大的麻烦是特异性问题,特异性不好,杂带会比较多.有时引物设计的特异性比较好,常规pcr就基本搞定.
建议你的模板量不要太大,在设置pcr条件时,先做5个稍高的退火温度,以扩增出更多的特异性产物,再用低2-3度的退火温度做后面的循环.
如果杂带多,建议用梯度pcr仪,先做梯度退火温度,看什么条件下杂带少,就先用这个温度p上5-10个循环,再降温.
祝实验顺利,欢迎继续讨论!
建议你的模板量不要太大,在设置pcr条件时,先做5个稍高的退火温度,以扩增出更多的特异性产物,再用低2-3度的退火温度做后面的循环.
如果杂带多,建议用梯度pcr仪,先做梯度退火温度,看什么条件下杂带少,就先用这个温度p上5-10个循环,再降温.
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